骨髓間充質幹細胞（BMSCs）在特定誘導條件下可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等

細胞

譜系。

由於BMSCs易於分離和儲存，免疫原性低、腫瘤風險低、倫理爭議小等優勢，其在細

胞治療和再生醫學領域表現廣闊的應用價值。

今天小翌就來給大家分享BMSCs相關知識。

▲ 圖源pixabay

BMSCs細胞分離方法

BMSCs細胞分離方法

1

差速貼壁法

：利用了BMSCs與骨髓中其他細胞的貼壁效能差異及酶消化敏感性差異而逐步達到純化擴增

概念

：快速、簡單、經濟

優點

：細胞純度相對不高

缺點

2

密度梯度離心法

：針對骨髓中不同細胞的大小和密度差異進行分選。

概念

：非常經濟

優點

：分選的細胞特異性有限，操作較難掌握

缺點

3

流式細胞熒光分選法( FACS)

：基於細胞表面標誌物的分選方式主要透過特異性識別BMSCs上的表面抗原而針對性篩選出目的細胞

概念

：分選所獲細胞的純度更高，也可以同時對多個表面標誌物乃至細胞內標準物進行識別

優點

：操作較複雜，對實驗要求高，價格昂貴，細胞通量低而分選時間長，對細胞活性影響相對較大

缺點

4

免疫磁珠分選法( MACS)

：基於細胞表面標誌物的分選方式主要透過特異性識別BMSCs上的表面抗原而針對性篩選出目的細胞

概念

：操作簡單而快速，細胞通量高，成本相對低，對細胞活性影響低

優點

：無法同時標記兩個或多個生物標誌物

缺點

BMSCs細胞鑑定

在體外標準培養條件下，細胞必須是呈梭形形態的黏附細胞。

BMSCs細胞鑑定

透過流式細胞術檢測，細胞表面抗原表達

CD105，CD73

和

CD90

必須

≥95%，

同時表達

CD45、CD34、CD14

或

CD11b、CD79α，

或

CD19

和

HLA － DＲ

必須

≤2%。

細胞在標準體外分化條件下能夠分化為成骨細胞、脂肪細胞和成軟骨細胞。

培養的難點在於保持細胞活性，不同種屬來源的BMSCs在體外培養擴增方法基本相似，但是細微的營養條件、培養環境等差異都將會對細胞效能產生影響。

▍

BMSCs細胞培養

在細胞分離、鑑定、培養過程中，需要注意細胞是否受到支原體汙染，

BMSCs細胞培養

但常常被研究者忽視，原因在於支原體汙染的培養液可能不發生混濁的現象，這就導致了很難被肉眼所觀察到。被支原體汙染的細胞生長變慢、狀態變差，雖不會馬上致死，但會影響其機體內的各種引數。

▍ 培養條件

▍

消化、傳代、凍存

支原體汙染髮生的頻率很高，

支原體汙染髮生的頻率很高，

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Yeasen一步法恆溫支原體檢測試劑採用獨有的等溫擴增技術，在顏色判別方面具有更強的辨識度，

Yeasen 40612

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▲ 圖2。一步法支原體檢測操作流程

▍

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MycAway

支原體去除試劑

（1000×）

是一種混合製劑，可透過抑制 DNA 和支原體生長所必須的相關蛋白合成來取得良好的支原體清除效果且對細胞無傷害，最大程度上挽救您的細胞，減少因支原體汙染帶來的損失。

去除前

去除後

▲ 圖3。

Yeasen MycAway

支原體去除效果的展示

▍

要一步法即可檢測支原體的存在

要一步法即可檢測支原體的存在

要一步法即可檢測支原體的存在

：對細胞毒性小，不影響後續細胞實驗，如細胞活力檢測和細胞轉染等；

-20℃試劑能較長時間儲存並保持高效用；

由藍紫色（

只需將產品新增至支原體汙染的培養基中孵育即可；

由藍紫色（

陰性

最快3天即可見效；

）向天藍色

）向天藍色

能去除實驗室絕大多數支原體型別。

▲ 圖4。

支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示