鹼變性可避免DNA的降解、熱變性要在低DNA濃度（100μg/ml）和低鹽濃度（0。1SSC 15mmol/L NaOH，1。5mmol/L檸檬酸三鈉，pH7。0）下進行。用SSC稀釋DNA溶液為50μg/ml，加10mol/l NaOH使最終濃度為0。1mol/L（pH約12。8），室溫變性10min，很快置冰鹽水中，用10mol/l HC1或5mol/L NaH2PO4調pH到7-

8（亦可用鹼變性後，調至中性，再加熱100℃後，調至中性，或只加熱100℃10min）。DNA變性可用OD260增加（約30-40%）來檢測，變性DNA醇沉澱呈雪樣，完全失去纖維狀沉澱。變性後加入等量冷的12×SSC，冰溶儲存。

2．變性DNA在硝酸纖維素膜上的固定。硝酸纖維素濾膜（孔徑0。45um）先在蒸餾水中充分浸泡，再用6SSC浸泡30min～2h，涼幹，DNA樣品轉移或加至硝酸纖維素膜上後，先室溫乾燥4h，然後再在80℃真空乾燥2h。

3．預雜交。溼潤的濾膜放入可加熱封口的塑膠袋中，按每平方釐米膜加0。2ml預熱至60℃的預雜交液（6×SSC，0。5%SDS，5×Denhardt液，100μg/ml鮭魚精DNA）。鮭魚精DNA需經過剪下和DNA酶消化處理，然後酒精沉澱純化，調濃度至

10μg/ml，用前放100℃水溶液中煮沸變性10min，冰水驟冷。儘可能將袋中氣泡趕盡，用封口器將袋口封住。將雜交袋浸入68℃水浴中保溫3-12h，當預雜交液溫度升至68℃時，在濾膜表面常會形成水氣泡，輕輕晃動袋中液體即可除去這些小氣泡，這一點對於保證濾膜表面充分浸潤預雜交液很重要。